冷冻精子的操作流程
原标题：冷冻精子的操作程序
冷冻精子的操作过程
1、精子的收集
在禁欲期（通常3至5天）后，通过手动手动在10-20mL无菌聚丙烯样品收集容器中收集精子。需要禁欲期以通过冷冻保存更好地保存样品。一般来说，这种精子与收集前的禁欲期相比较。
在禁欲期（通常3至5天）后，通过手动手动在10-20mL无菌聚丙烯样品收集容器中收集精子。需要禁欲期以通过冷冻保存更好地保存样品。一般来说，这种精子在冷冻保存后比精子更稳定，更完整，而精子在收集前具有较短和不规则的禁欲。
注射的精液是液体，但在正常条件下立即凝结成凝胶。凝结的精液通常在30分钟内液化，此时可以确定其体积。为了获得精子的最大冰冻活力，液体精子应在收集精液后1分钟内冷冻保存。
2、体积的测量
体积可以用类似的涂药器或带针的5mL注射器测量，有时可以根据精液收集前后样品瓶重量之间的差异来计算。取0.1~0.2mL精液进行精液分析（精子百分比及其质量，精子密度等，参见本书相关章节），除需要服用一些精液外，同时用于筛选检测某些性传播疾病，进行某些测试以筛查导致性传播疾病的微生物，如淋病奈瑟菌（详见相关章节）。
3、甘油化
甘油用作冷冻保护剂，并且可以以逐步方式直接添加到未处理的精液中。每次添加后混合，时间间隔为1分钟;或间接作为扩张液或基液的组分，并在稀释后逐渐加入精液。在美国和加拿大，超过40％的着名精子库仍仅使用甘油作为冷冻保护剂，并且越来越多的新精子库使用扩张器，尤其是含甘油的两性离子缓冲系统。
甘油化的条件不一定涉及特殊的温度条件（室温除外）和接触时间（加入甘油和混合物所需的时间除外）。
4、包装和存活力观察
甘油精液可以用塑料移液管吸入（可用密封剂密封，加热或用尼龙塞密封）或放入玻璃安瓿（用火焰密封）或置于塑料冷冻管（冷冻小瓶）中并用一个螺帽。每个冷冻精液的体积通常为0.4至0.8 mL，可用作人工授精的单位。当然，如果合适的话，人工授精也可以使用一个以上的精液单位，选择一个用于冷冻保存精子的容器是很重要的。这种容器应易于标记，处理和储存，并且具有良好的生物相容性和抗压性。高质量的聚丙烯吸管或小瓶似乎最符合这些标准，没有玻璃容器的缺点，例如易碎和污染的洗涤剂。
除了在液氮中冷冻之前需要分配冷冻和储存的精子之外，还需要质量控制测试样品。对于收集后未经处理的精液，用冷冻保护剂处理的精液，储存前和冷冻和解冻后的精液，应观察活性精子及其活性。通过观察，我们可以追踪冷冻保存每个阶段的精子存活率，并确保冷冻精子的存活。
5、冷冻
当冷冻储存时，吸管和安瓿中的精液可以分散或储存成组，并且位置保持垂直，水平或倾斜。它通常置于液氮雾中，有时置于机械（电子）冷冻机的冷冻室中。冷却和冷冻过程可以手动或以静态或逐步方式完成，或通过计算机控制的液氮供应系统完成。最常见的是，操作者利用液氮储存容器中的气相进行直接，一次或逐渐冷冻。具有吸附液氮的石棉衬里的生物干燥输送机也可以在气相中用于冷冻，然后转移到液相的储存容器中。
6、储存
分配的样品应储存在液氮中的金属容器中，这些容器应放在合适的液氮冷冻机中。用于监测液氮水平的装置[机械和/或电子]是用于监测水平水平的常用机械（手动）方法，以防止精子功能丧失，以便在液氮温度以上长期储存（-196） C）。当将定标柱塞垂直插入液氮底部时，在其上形成霜线以指示液氮水平。至于各种复杂的本地和远程电子报警系统，现在有许多国家可供使用。所有这些都在市场上有售。另一方面，使用闪光灯定期目视检查少量精子库。 AATB组织库标准仅需要有效的监测程序以确保样品始终储存在液氮表面下方。冷冻生物学家和相关研究人员通过熔化储存前样品和测试，发现在冷冻初期有一些精子活力丧失。然而，储存在液氮表面下-196℃的冷冻精子没有进一步的活性损失。已经证实，治疗前癌症患者精液的精子存活率通常较差（解冻后精子活力的百分比降低）但是，这种降低的运动能力在长期储存期间不会进一步降低。
在接受调查的42个AATB成员的组织库中，只有两个报告了精液[由正常供体和/或治疗前患者提供]，用于长期保存期间精子活力丧失的例子。据报道，只有1例精子活力丧失3年后的低温保存。可以接受的是，在冷冻之前不能准确地确定储存期间精子活力的丧失，或者更可能是由于未能确保最佳储存条件。
7、解冻
冷冻精液可以通过将含有冷冻精子的包装暴露在空气或水中而恢复到液态。通常暴露在室温下，但也可能暴露在其他温度下，这取决于每个精子库设计的方法。
8、分发
如果临床医生需要冻结精子进行试管婴儿-ET，精子库应按要求送到医院（或）诊所。冷冻的精子应从精子库的储存柜中取出，放入装有液氮或固体二氧化碳（干冰）的特殊装运箱中.
。然而，如果精子库在医院并且非常靠近手术室，则它可以不放置在上述特殊运输箱中，而是可以直接送到手术室供医生使用。临床使用前冷冻精子的融化有助于通过质量控制重新评估精子存活率。
